新城疫病毒抗體檢測試劑盒（酶聯(lián)免疫法）

使用說明書

【產(chǎn)品名稱】

通用名：新城疫病毒抗體檢測試劑盒（酶聯(lián)免疫法）

英文名：Test Kit for Antibodies to Newcastle Disease Virus （ELISA）

【包裝規(guī)格】 96T×1/盒、96T×2/盒、96T×5/盒

【預(yù)期用途】 新城疫又名偽雞瘟或亞洲雞瘟，是由新城疫病毒（Newcastle Disease Virus，NDV）引起的禽類的一種急性高度接觸性傳染病，以呼吸困難、下痢、神經(jīng)機(jī)能紊亂、粘膜出血為特征。

本試劑用于檢測雞、鴨、鵝等禽類血清、血漿或蛋黃中新城疫病毒抗體，可用于免疫效果評(píng)價(jià)、輔助診斷等。

【原    理】

    本試劑盒由預(yù)包被新城疫病毒抗原的酶標(biāo)板、抗體工作液、酶標(biāo)記物及其他配套試劑組成，應(yīng)用競爭酶聯(lián)免疫法原理檢測禽類血清、血漿或蛋黃中新城疫病毒抗體。實(shí)驗(yàn)時(shí)在酶標(biāo)板中加入稀釋的待檢樣本和抗體工作液，若樣品中含有新城疫病毒抗體則將阻斷抗體工作液與酶標(biāo)板上抗原結(jié)合，從而使后續(xù)反應(yīng)不出現(xiàn)顯色；反之則出現(xiàn)顯色；顯色深淺與樣品中的特異性抗體含量成負(fù)相關(guān)；加入終止液終止反應(yīng)后，產(chǎn)物變?yōu)辄S色；用酶標(biāo)儀在450nm波長測定各反應(yīng)孔中的吸光值，即可知樣品是否含有新城疫病毒抗體。

【試劑盒組成】

【儲(chǔ)存及有效期】 2～8℃保存，有效期12個(gè)月。

包被板開封后請(qǐng)于2～8℃避光保存，避免受潮。使用期限為2個(gè)月。

【適用儀器】 含450nm、630nm波長的酶標(biāo)儀，37℃恒溫設(shè)備，可調(diào)微量移液器。

【樣品準(zhǔn)備】

1.血清/血漿：取動(dòng)物全血按常規(guī)方法制備血清或血漿，要求血清/血漿清亮，無溶血、無污染。樣品1周內(nèi)可于2～8℃保存，長期需置-20℃保存。

      蛋黃：取2ml新鮮蛋黃加2ml生理鹽水震蕩混勻，3000轉(zhuǎn)/分鐘離心15分鐘，取上清作為樣本。

2.待檢血清、血漿或已處理蛋黃樣本恢復(fù)室溫、混勻待用。陰、陽性對(duì)照不用稀釋。

3.濃縮洗滌液使用前應(yīng)恢復(fù)至室溫使沉淀溶解，然后用蒸餾水或去離子水作20倍稀釋成工作洗滌液(如19份蒸餾水或去離子水+1份濃縮洗滌液)。

【檢驗(yàn)方法】

1.使用前將試劑盒置室溫30分鐘，恢復(fù)至室溫。

2.取所需用量酶標(biāo)板條，設(shè)陰性/陽性對(duì)照各2孔，未用的板條盡快密封，2～8℃保存。

3.陰、陽性對(duì)照孔分別加入陰、陽性對(duì)照50μl；樣品孔每孔先加入40μl工作洗滌液,再加入10μl待檢樣本。

4.每孔加抗體工作液50μl，混勻，蓋好蓋板膜，置37℃（推薦水?。┍芄夥磻?yīng)30分鐘。

5.甩去孔內(nèi)液體，每孔加350μl工作洗滌液，靜置30秒后棄去，重復(fù)洗滌5次，最后一次拍干。

6.每孔加酶標(biāo)記物100μl，蓋好蓋板膜，置37℃避光反應(yīng)30分鐘。

7.洗滌，同步驟5。

8.每孔依次加底物液A、底物液B各50μl，混勻蓋好蓋板膜，置37℃避光反應(yīng)15分鐘。

9.每孔加終止液50μl，混勻，于450nm(可用630nm作參比波長）測定各孔吸光值（A值）。

【參考值】實(shí)驗(yàn)正常的情況下，陰性對(duì)照吸光值≥1.0，陽性對(duì)照吸光值≤陰性對(duì)照吸光值×50%。

【檢驗(yàn)結(jié)果的解釋】

1. PI（阻斷率）=（1- 陰性對(duì)照平均A值(樣本A值)）×100%，PI≥50%為陽性；PI＜50%為陰性。

2.未曾免疫雞群：結(jié)果為陽性時(shí)表明可能有感染，需結(jié)合臨床資料進(jìn)行分析。

3.免疫雞群：監(jiān)測并記錄樣本當(dāng)時(shí)的抗體水平，根據(jù)結(jié)果分析抗體水平的分布及雞群免疫狀態(tài)的動(dòng)向。

【試驗(yàn)方法的局限性】

    該試驗(yàn)僅作為定性檢測新城疫病毒抗體，根據(jù)PI值高低可作抗體水平強(qiáng)、中、弱的粗略評(píng)估。

【注意事項(xiàng)】

1.實(shí)驗(yàn)操作時(shí)需戴手套、穿工作衣，嚴(yán)格健全和執(zhí)行消毒隔離制度，各種實(shí)驗(yàn)廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。

2.終止液具有腐蝕性，應(yīng)避免接觸皮膚和衣物，如不慎接觸請(qǐng)立即用大量自來水沖洗。

3.酶標(biāo)板從冷藏環(huán)境中取出時(shí)應(yīng)恢復(fù)至室溫方可開袋，未用完的酶標(biāo)板需放入有干燥劑的密封袋中保存。

4.濃縮洗滌液在低溫時(shí)容易結(jié)晶，使用時(shí)需恢復(fù)至室溫溶解。

5.洗滌時(shí)各孔均需加滿液體，防止孔口有游離酶不能洗凈。

6.用于檢測的樣品應(yīng)保持新鮮。

7.試驗(yàn)結(jié)果的判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn)。

8.不同批號(hào)試劑組分不得混用。