(Cholesterol)又稱(chēng)膽甾醇，是一種環(huán)戊烷多氫菲的衍生物，廣泛存在于動(dòng)物體內(nèi)，其中腦、神經(jīng)組織，在腎、脾、皮膚、

肝和膽汁中含量也較高，用酶學(xué)方法測(cè)定總(Total Cholesterol，TC)是生化檢測(cè)中的常用方法，其特點(diǎn)是：

1、靈敏度、準(zhǔn)確度、精密度均高；2、使用溫和的反應(yīng)條件；3、操作簡(jiǎn)便；4、適用于自動(dòng)分析儀。

(YS)檢測(cè)試劑盒(COD-PAP雙試劑微板法)又稱(chēng)氧化酶法或氧化酶-過(guò)氧化物酶偶聯(lián)法等，血液中的約1/3為游

2/3為與脂肪酸結(jié)合的酯，后者被酯酶(CEH)水解為游離，游離被氧化酶(COD)氧化成膽甾烯酮，并產(chǎn)生過(guò)氧化氫，

再經(jīng)過(guò)氧化物酶(POD)催化，使4-氨基安替(三者合稱(chēng)PAP)反應(yīng)，生成紅色醌亞胺色素(Trinder反應(yīng))，

分光光度計(jì)在500~520nm處進(jìn)行比色測(cè)定，用于人或動(dòng)物的血清、血漿、腦脊液、細(xì)胞、組織等樣本中的總含量定量測(cè)定。

該試劑盒僅用于科研領(lǐng)域，不適用于臨床診斷或其他用途。

操作步驟(僅供參考)：

1、取內(nèi)徑為8mm的玻璃試管2支，分別加入白陶土-腦磷脂混懸液0.2ml。

2、靜脈采血1ml，立即取下針頭，沿管壁向各試管注入血液0.5ml，立即混勻并啟動(dòng)秒表計(jì)時(shí)，并置于37℃水浴中。

3、每隔10s輕搖試管一次，觀察管內(nèi)血液流動(dòng)情況，直至血液凝固。記錄血液凝固所需時(shí)間，即為ACT。

4、取2支試管血液凝固時(shí)間的平均值作為ACT 值。

計(jì)算：參考區(qū)間： (1.77±0.76)min

4、配制標(biāo)準(zhǔn)品工作液︰如果檢測(cè)血清、尿液等樣品，按取丙酮酸標(biāo)準(zhǔn)(6mg/ml):蒸餾水=1：99的比例配制，使?jié)舛冗_(dá)到60μg/ml，如果檢測(cè)組織樣品按丙酮酸標(biāo)準(zhǔn)(6mg/ml) :組織勻漿液(1×)=1:99的比例配制，使?jié)舛冗_(dá)到60μg/ml。

注意事項(xiàng):

1、實(shí)驗(yàn)材料應(yīng)盡量新鮮，如取材后不立即使用，應(yīng)存于-20°C.

2、實(shí)驗(yàn)用蒸餾水不能含有二氧化碳，可用新煮沸且冷卻后的蒸餾水，并蓋緊口。

3、TA滴定液為堿性溶液，有腐蝕性，請(qǐng)小心操作。

4、TA標(biāo)定液容易長(zhǎng)菌，宜4℃保存，一旦發(fā)現(xiàn)有絮狀物請(qǐng)棄用。

5、果實(shí)中含酸量較少時(shí)可將TA滴定液適當(dāng)稀釋后使用，可考慮用0.01~0.05M  TA滴定液進(jìn)行滴定。

6、TA滴定液含量計(jì)算公式中，V0最好為3次空白測(cè)定的平均值。

7、如果所測(cè)樣品的濃度過(guò)高，應(yīng)用TA Lysis Buffer工作液稀釋樣品后重新測(cè)定，并將稀釋倍數(shù)帶入公式。

8、如果樣品顏色較深，滴定終點(diǎn)不易觀察，應(yīng)采用電位滴定法。

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